基因檢測試劑盒是根據SRY基因組的特點設計生物素標記的引物·▩•◕,PCR擴增SRY基因目的片段◕·◕◕↟。將SRY基因特異性寡核苷酸探針固定在尼龍膜上◕·◕◕↟。根據生物素-親和素系統(biotin-avidin system·▩•◕,BAS)原理·▩•◕,將PCR擴增產物與固化在膜條上的探針雜交·▩•◕,洗膜後加入辣根過氧化合物酶標記的親和素(POD)·▩•◕,與PCR產物上的生物素結合◕·◕◕↟。加入顯色液(TMB·▩•◕,H2O2)·▩•◕,辣根過氧化物酶催化其底物H2O2分解·▩•◕,TMB作為供氫體參與反應後產生藍色的斑點◕·◕◕↟。根據雜交訊號斑點的有無來判斷樣本中是否存在SRY基因◕·◕◕↟。本試劑盒能有效檢測血漿中微量SRY基因◕·◕◕↟。
基因檢測試劑盒使用注意事項▩·☁:
1•╃☁、測定中需使用的所有試劑和96孔板提前30min放置室溫溫育(否則會影響試驗準確性)·▩•◕,注意12連管必須溫育後再從平板上取下·▩•◕,未使用完的預包被板條應置於有乾燥劑的封口袋中密封儲存;加樣時·▩•◕,要注意各成分加入量的準確◕·◕◕↟。例如·▩•◕,對於加入體積較大的成分來說應保證移液器的準確·▩•◕,而對於加樣量較小的成分·▩•◕,除保證移液器的準確外·▩•◕,還應注意儘量將液體加入已有液體的液麵之下·▩•◕,確保成分加入◕·◕◕↟。操作應嚴格按照說明書要求及步驟進行·▩•◕,每批實驗應保證與陰性對照和陽性對照同時進行檢測與分析·▩•◕,以確保檢測環境與檢測試劑效能的合格◕·◕◕↟。
2•╃☁、加樣完畢後·▩•◕,依據試劑盒對應耗材選擇正確且匹配的熒光PCR儀進行擴增反應及熒光收集◕·◕◕↟。試劑使用前應充分搖勻;
3•╃☁、搖動平板混勻時注意避免樣品之間交叉汙染;
4•╃☁、使用洗滌液漂洗時·▩•◕,洗滌液需要填滿每個小孔·▩•◕,進行充分漂洗;
5•╃☁、研磨好的樣品如果不能一次全部測量·▩•◕,可以暫時在4℃避光儲存·▩•◕,但是建議在24h內測定;
6•╃☁、結果判讀應以陽性對照作為標準·▩•◕,嚴格按照說明書進行·▩•◕,結果判讀請在反應終止後15min內完成◕·◕◕↟。