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病原體檢測試劑盒操作的幾大要點須知

  • 釋出日期╃↟:2022-06-13      瀏覽次數╃↟:234
    •   病原體檢測試劑盒是一種經典的利用DNA熒光染色法檢測支原體汙染的試劑盒✘•·,其原理是當細胞發生凋亡時✘•·,染色質會固縮✘•·,Hoechst染色後在熒光顯微鏡下觀察✘•·,正常細胞的細胞核呈正常的藍色✘•·,而凋亡細胞的細胞核會呈緻密濃染✘•·,或呈碎塊狀緻密濃染✘•·,顏色有些發白·│₪☁•。
       
        病原體檢測試劑盒操作步驟╃↟:
        (一)貼壁細胞
        1·✘▩、將蓋玻片置於6孔板或其他培養皿內✘•·,接種細胞培養過夜✘•·,使融合率約為50%~80%·│₪☁•。
        2·✘▩、加入干預條件使細胞發生凋亡後✘•·,吸盡培養液✘•·,加入Hoechst固定液·│₪☁•。
        3·✘▩、去除固定液✘•·,用PBS或生理鹽水洗2次·│₪☁•。洗滌時宜用搖床✘•·,或手動晃動·│₪☁•。
        4·✘▩、加入Hoechst 染色液✘•·,孵育·│₪☁•。也宜用搖床✘•·,或手動晃動數次·│₪☁•。
        5·✘▩、棄染色液✘•·,PBS或生理鹽水洗2次✘•·,吸盡液體·│₪☁•。洗滌時宜用搖床✘•·,或手動晃動·│₪☁•。
        6·✘▩、滴一滴抗熒封片劑於載玻片上✘•·,蓋上貼有細胞的蓋玻片✘•·,避免氣泡·│₪☁•。
        (二)懸浮細胞
        1·✘▩、加入Hoechst固定液✘•·,緩緩懇起細胞✘•·,固定10min或更長時間(亦可4℃過夜)·│₪☁•。
        2·✘▩、低速離心去除固定液✘•·,用PBS 或生理鹽水洗2次·│₪☁•。洗滌時手動晃動數次·│₪☁•。
        4·✘▩、稍晾乾✘•·,使細胞貼在載玻片上不易隨液體流動·│₪☁•。
        5·✘▩、均勻滴上Hoechst染色液·│₪☁•。用吸水紙從邊緣吸去液體✘•·,微晾乾·│₪☁•。
        6·✘▩、棄染色液✘•·,用PBS或生理鹽水洗2次✘•·,吸盡液體·│₪☁•。洗滌時宜用搖床手動·│₪☁•。
        7·✘▩、滴一滴抗熒光封片劑於載玻片上✘•·,蓋上一潔淨的蓋玻片✘•·,儘量避免氣泡·│₪☁•。
        8·✘▩、熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核·│₪☁•。
        (三)組織切片
        1·✘▩、常規包埋切片·│₪☁•。用PBS 或生理鹽水洗2次·│₪☁•。洗滌時手動晃動數次·│₪☁•。
        2·✘▩、均勻滴上Hoechst染色液·│₪☁•。.
        3·✘▩、棄染色液✘•·,PBS或生理鹽水洗2次✘•·,吸盡液體·│₪☁•。洗滌時宜用搖床或手動·│₪☁•。
        4·✘▩、將切片置於載玻片上✘•·,滴一滴抗熒光封片劑✘•·,蓋上一潔淨的蓋玻片✘•·,儘量避免氣泡·│₪☁•。
        5·✘▩、熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核·│₪☁•。激發波長350nm左右✘•·,發射波長460nm左右·│₪☁•。
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