病原體檢測試劑盒操作的幾大要點須知

　　病原體檢測試劑盒是一種經典的利用DNA熒光染色法檢測支原體汙染的試劑盒▩₪，其原理是當細胞發生凋亡時▩₪，染色質會固縮▩₪，Hoechst染色後在熒光顯微鏡下觀察▩₪，正常細胞的細胞核呈正常的藍色▩₪，而凋亡細胞的細胞核會呈緻密濃染▩₪，或呈碎塊狀緻密濃染▩₪，顏色有些發白▩₪↟。
 
　　病原體檢測試劑盒操作步驟✘☁╃☁•：
　　（一）貼壁細胞
　　1↟·▩₪╃、將蓋玻片置於6孔板或其他培養皿內▩₪，接種細胞培養過夜▩₪，使融合率約為50%~80%▩₪↟。
　　2↟·▩₪╃、加入干預條件使細胞發生凋亡後▩₪，吸盡培養液▩₪，加入Hoechst固定液▩₪↟。
　　3↟·▩₪╃、去除固定液▩₪，用PBS或生理鹽水洗2次▩₪↟。洗滌時宜用搖床▩₪，或手動晃動▩₪↟。
　　4↟·▩₪╃、加入Hoechst 染色液▩₪，孵育▩₪↟。也宜用搖床▩₪，或手動晃動數次▩₪↟。
　　5↟·▩₪╃、棄染色液▩₪，PBS或生理鹽水洗2次▩₪，吸盡液體▩₪↟。洗滌時宜用搖床▩₪，或手動晃動▩₪↟。
　　6↟·▩₪╃、滴一滴抗熒封片劑於載玻片上▩₪，蓋上貼有細胞的蓋玻片▩₪，避免氣泡▩₪↟。
　　（二）懸浮細胞
　　1↟·▩₪╃、加入Hoechst固定液▩₪，緩緩懇起細胞▩₪，固定10min或更長時間（亦可4℃過夜）▩₪↟。
　　2↟·▩₪╃、低速離心去除固定液▩₪，用PBS 或生理鹽水洗2次▩₪↟。洗滌時手動晃動數次▩₪↟。
　　4↟·▩₪╃、稍晾乾▩₪，使細胞貼在載玻片上不易隨液體流動▩₪↟。
　　5↟·▩₪╃、均勻滴上Hoechst染色液▩₪↟。用吸水紙從邊緣吸去液體▩₪，微晾乾▩₪↟。
　　6↟·▩₪╃、棄染色液▩₪，用PBS或生理鹽水洗2次▩₪，吸盡液體▩₪↟。洗滌時宜用搖床手動▩₪↟。
　　7↟·▩₪╃、滴一滴抗熒光封片劑於載玻片上▩₪，蓋上一潔淨的蓋玻片▩₪，儘量避免氣泡▩₪↟。
　　8↟·▩₪╃、熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核▩₪↟。
　　（三）組織切片
　　1↟·▩₪╃、常規包埋切片▩₪↟。用PBS 或生理鹽水洗2次▩₪↟。洗滌時手動晃動數次▩₪↟。
　　2↟·▩₪╃、均勻滴上Hoechst染色液▩₪↟。.
　　3↟·▩₪╃、棄染色液▩₪，PBS或生理鹽水洗2次▩₪，吸盡液體▩₪↟。洗滌時宜用搖床或手動▩₪↟。
　　4↟·▩₪╃、將切片置於載玻片上▩₪，滴一滴抗熒光封片劑▩₪，蓋上一潔淨的蓋玻片▩₪，儘量避免氣泡▩₪↟。
　　5↟·▩₪╃、熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核▩₪↟。激發波長350nm左右▩₪，發射波長460nm左右▩₪↟。